玻璃酸酶测定法

玻璃酸酶测定法

试剂

（1） 醋酸-醋酸钾缓冲液 取醋酸钾 14g，冰醋酸 20.5ml，再加水稀释至 1000ml。

（2） 磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠 2.5g、无水磷酸氢二钠 1.0g 与氯化钠 8.2g，加水溶解至 1000mL。

（3） 水解明胶 取明胶 50g，加水 1000ml，在 121℃加热 90 分钟，然后冷冻干燥。

（4） 水解明胶稀释液 取磷酸盐缓冲液与水各 250ml，加水解明胶 330mg，摇匀，在 0～4℃保存。如溶液不发生浑浊，可继续使用。

（5） 血清贮备液 取新鲜牛血清或冻干牛血清（先用水溶解并稀释至标示量体积）1份，加醋酸-醋酸钾缓冲液 9 份稀释，再以 4mol/L 盐酸溶液调节 pH 值至 3.1，放置 18～24小时后再用。在 0～4℃保存，可应用 30 日。

（6） 血清溶液  血清贮备液中血清总固体（取牛血清适量，置装有洁净砂粒并在 105℃干燥至恒重的坩埚中，置水浴上蒸干后，再在 105℃干燥至恒重）在 8%左右者，取 1 份，用醋酸-醋酸钾缓冲液 3 份稀释；血清总固体在 5%左右者，取 1 份，用醋酸-醋酸钾缓冲液 2份稀释。临用时制备。

（7） 玻璃酸钾贮备液 取预先经五氧化二磷减压干燥 48 小时的玻璃酸钾，加水制成每 1ml 中含 0.5mg 的溶液。在 0℃以下保存，可应用 30 日。

（8） 玻璃酸钾溶液 取玻璃酸钾贮备液 1 份，用磷酸盐缓冲液 1 份稀释。临用时制备。

标准品溶液的制备 精密称取玻璃酸酶标准品适量，加冷的水解明胶稀释液制成每1ml 中含 1.5 单位的溶液。临用时制备。

供试品溶液的制备 按供试品的标示量或估计效价精密称取供试品适量，加冷的水解明胶稀释液制成每 1ml 中含约 1.5 单位的溶液。临用时制备。

标准曲线的制备 取大小相同的试管 12 支，按顺序加入标准品溶液 0.00ml、0.10ml、 0.20ml、0.30ml、0.40ml 与 0.50ml，各 2 支；再依次相应加入水解明胶稀释液 0.50ml、0.40ml、0.30ml、0.20ml、0.10ml 与 0.00ml，每隔 30 秒顺序加入玻璃酸钾溶液 0.50ml，使每一管的总体积为 1.00ml，摇匀，置 37℃±0.5℃水浴中；每管准确保温 30 分钟后，每间隔 30 秒钟

顺序取出，立即顺序加入血清溶液 4.0ml，摇匀，在室温放置 30 分钟，摇匀，在 640nm 的波长处测定吸光度；同时以磷酸盐缓冲液 0.50ml 代替玻璃酸钾溶液，加水解明胶稀释液 0.50ml，摇匀，按上述方法自“置 37℃±0.5℃的水浴中"起同法操作，作为空白。以吸光度为纵坐标，标准品溶液的效价（单位）为横坐标绘制标准曲线。

测定法 取大小相同的试管 6 支，依次加供试品溶液 0.20ml、0.30ml 与 0.40ml，各 2支；再依次相应加入水解明胶液 0.30ml、0.20ml 与 0.10ml，照标准曲线的制备项下， 自“每隔 30 秒顺序加入玻璃酸钾溶液 0.50ml"起，依法测定，自标准曲线上查得效价（单位）后，分别除以供试品的重量（mg），算出 6 份供试品的平均数，即为玻璃酸酶的效价（单位）。